简要技术说明及主要技术性能指标
(一)独创电击法获取两栖动物皮肤分泌液的方法。采用电刺激法获得实验用皮肤分泌液。优点在于得率高,对动物伤害小,其他组织来源组分的污染小和可重复使用等优点。实验用两栖类动物经取样后,均放活于自然,基本没有对动物产生伤害和对生态造成破坏。
(二)从两栖类动物皮肤分泌液快速筛选生物活性肽技术平台的建立
皮肤分泌液中的肽组分通过高效液相色谱分离得到有效的分离,进一步进行各组分的质谱分析,建立了各组分的特征指标(Profile)。该特征指标(Profile)的建导不但为后继的研究提供了便利,而且它还提供了一种快速鉴定和筛选生理活性肽的手段。
(三)首次对福建蛙类和蟾蜍皮肤分泌液中生物活性肽进行分离、结构测定和生物活性表征
课题对福建省内存在的15种两栖类动物的皮肤分泌物进行了普遍性研究和筛选,并对其中大部分进行了深入研究。从四种不同两栖类动物(中国大蹼铃蟾、福建沼水蛙、福建花绿臭蛙和竹叶臭蛙)的皮肤分泌液获得24种新型抗菌肽,其中包括四种Brevinin 2家族新成员,四种Esculentin-1家族新成员,四种BLP家族新成员,三种Brevinin-1家族新成员,三种Bombinin家族新成员,一种Temporin家族新成员,一种新发现的Guentherin和四种新发现的Odorrin。通过最小抑制浓度(Minimal Inhibition Concentration,MIC)分析,大部分抗菌肽具有较强的抗菌活性。
(四)在国际上首次对两栖类动物皮肤分泌液进行了转录物组学(transcriptomes)研究。
首次发现两栖类皮肤分泌液中不仅包括物质,如组织胺,生物碱,多肽和蛋白质等物质外,还包括poly-A mRNA,并成功的提取该mRNA构建cDNA文库。该皮肤分泌液来源的cDNA文库构建方法取代了传统的皮肤来源的cDNA文库构建方法,避免了杀死并对两栖类动物实施剥皮的做法。
推广应用前景与措施:
抗菌肽杀菌机理独特,病原菌不易对抗菌肽产生耐药性,且抗菌肽产品具广谱抗菌作用,对畜禽具促生长、保健和治疗疾病的功能,属无毒副作用、无残留、无致细菌耐药性的一类环保型制剂。寻找各种动物内源性抗菌物质,以现代生物技术方法工业化生产在抗病原菌上具有动物"种"专一性或特异性的系列产品,必将成为替代抗生素的新型饲料添加剂。
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