本发明涉及一种免疫层析试条定量检测仪的校准试条及其制作方法，该校准试条可以用来校准由纳米金颗粒、高分子纳米荧光微粒等长寿命物质作为显色标记物的免疫层析试条定量检测仪。校准试条的显色窗口包含有显色的测试线、质控线及除此之外的硝酸纤维素膜空白区域。测试线颜色由浅至深应至少具有5个梯度；测试线和质控线的颜色由对应颜色的真实试条经过扫描仪、数码相机等图像采集装置转变为数字图像，在计算机上由图像处理软件处理后得到；每个梯度颜色应采集不少于20根同一颜色范围的真实试条图像来确定；测试线和质控线由彩色打印机按照真实免疫层析试条的尺寸和对应图像的颜色打印在硝酸纤维素膜上；用于打印的硝酸纤维素膜固定在塑料基板之上。